制備柱分離步驟和選擇指南。制備柱就是高效液相色譜是一種分析方法，制備色譜是一種分離純化手段。高效液相色譜把普通的色譜柱換成制備柱，就是制備液相色譜，兩者的區(qū)別在于一種以分析為目的，追求的是檢測(cè)精度，樣品承載量非常??；接下來(lái)就來(lái)看看制備柱分離步驟和選擇指南。

　　一、制備柱分離步驟

　　1、考慮到填料由分析級(jí)直接放大到制備級(jí)的因素，如果要純化大量的化合物，需要考慮分析柱的規(guī)格和可作為制備柱的填料粒徑(10μm或更大)；作為在下一步純化產(chǎn)品量更大的項(xiàng)目，必須考慮選擇更大的填料粒徑和更大內(nèi)徑的色譜柱，在與分析柱相同的填料下對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行純化。

　　2、對(duì)分析柱(4.6mm內(nèi)徑或更小)選擇性的研究，應(yīng)在多種填料和多種色譜條件下進(jìn)行選擇，可以采用一些商品的液相色譜條件選擇軟件進(jìn)行多種色譜模式的比較選擇，這樣可以縮短分離條件選擇的時(shí)間。

　　3、在得到最佳的分離條件后，需要對(duì)分析柱上樣品的承載量進(jìn)行測(cè)試，比較多種上樣量下產(chǎn)物的純度，選擇最理想產(chǎn)物純度的最大上樣量。

　　4、選擇制備柱的規(guī)格，要依據(jù)在分析柱上得到的上樣量數(shù)據(jù)，進(jìn)行放大分離，通常選擇與分析柱相同粒徑的填料和色譜柱長(zhǎng)度來(lái)達(dá)到推測(cè)制備分離的預(yù)測(cè)。放大制備柱的上樣量應(yīng)基于制備柱和分析柱的交叉截面面積的比值來(lái)進(jìn)行選擇。

　　二、制備柱的選擇指南

　　第一步：選擇合適的填料

　　越小的粒徑具有越高的柱效，但是價(jià)格更高，并且?guī)?lái)更高的柱壓，要求設(shè)備的硬件具備更高的壓力耐受性。在被測(cè)組分的色譜峰與其它色譜峰非?？拷鼤r(shí)，就需要更高的柱效，此時(shí)較小粒徑的色譜填料就顯得非常有用。相反，越大的粒徑則柱效越低，但價(jià)格也相對(duì)較低,同時(shí)對(duì)設(shè)備的要求也不高(10um最常用)。

　　第二步：針對(duì)蛋白質(zhì)、多肽類(lèi)等物質(zhì)，選擇合適的鍵合相、孔徑。

　　由目前市場(chǎng)需求來(lái)看，蛋白質(zhì)、多肽等類(lèi)的物質(zhì)分離純化十分普遍，其中以C18、C8、C4的鍵合相居多，如何根據(jù)物質(zhì)分子量的大小，來(lái)選擇合適的含碳量和粒徑是個(gè)非常重要的問(wèn)題。而相同粒徑不同孔徑的效果也有不同，如120A、300A等，因此，孔徑的選擇也十分重要。

　　第三步：選擇合適的柱管。

　　樣品的上樣要與色譜柱的交叉截面面積相對(duì)稱(chēng)，要選擇色譜柱的內(nèi)徑要適合于樣品的上樣量（21.2最常用）。越長(zhǎng)的色譜柱具有越高的柱效和更高的樣品承載量，但是柱壓將會(huì)更高，同時(shí)分離時(shí)間可能會(huì)更長(zhǎng)（250mm最常用）。

　　以上就是制備柱分離步驟和選擇指南，當(dāng)然制備柱還有更多的操作步驟和知識(shí)，這邊只是說(shuō)了一小部分，可以致電研創(chuàng)生物進(jìn)行咨詢(xún)了解。