相信使用過液相色譜柱的小伙伴們都會出現這些的小問題！

常規(guī)思維中，色譜柱上標示的流向是不可改變的，每次使用都要遵循。可是，大家有沒有想過這個方向的作用是什么呢？為什么要標示一個使用方向呢？

原因很簡單：其實色譜柱前后端的填料及填裝工藝都是一樣的，標示方向的目的就是讓我們在使用中記住流動相從哪個方向流入色譜柱，那么這個流入端就是最先污染端。這樣就為我們日后維護或再生色譜柱做了準備，而我們需要遵循這個規(guī)定應該在色譜柱開始做樣后。

液相色譜柱作為比較昂貴的色譜耗材，也具有很多特性，如果不了解這些注意事項，一不留神就會用壞。

而且色譜柱的內部保存的溶劑是十分重要的，溶劑一般應具有低粘度、高純度、化學穩(wěn)定性好對樣品有合適的極性和良好的選擇性、與檢測器兼容性強、低毒等特征。所以色譜柱內部保存著什么溶劑一定要知道并且清楚，為此使用前，一定要看色譜柱的說明書，其中也包括說明書上建議的維護保養(yǎng)規(guī)定。

柱子類型不同，保存溶劑也會不一樣，具體要看說明書。對于反相柱，一般用甲醇(乙腈)保存，也有用80%左右甲醇濃度的甲醇/水保存的。一般用流動相平衡沖洗10-20個柱體積即可(注意：柱體積不等于空柱管體積，4.6x250mm的色譜柱空柱管體積是4.15ml，而柱體積只有約2.5ml)。

在接入色譜柱時，須先用合適的溶劑沖洗流路（包括流通閥、定量環(huán)和自動進樣器），部分溶劑（如丙酮、氯仿、二甲基甲酰胺、二甲基亞砜、乙酸乙酯、二氯甲烷和四氫呋喃等強溶劑）會破壞涂覆型手性固定相的結構，因此不得使用它們作為流動相或溶劑溶解樣品。

由于液相色譜柱需要活化，且內部保存的有機系具有揮發(fā)性，因此在使用前還是應該用小流速的和色譜柱內部相同的溶劑沖洗一定的時間。

不同的色譜柱會有不一樣的保存條件：例如研創(chuàng)的EnantioPak? R-C是鍵合型手性柱，正反相體系均適用，并且需要注意專柱專用，正相色譜柱在使用含酸/堿添加劑的正相流動相后，需用正己烷/異丙醇=90/10沖洗色譜柱50 min，然后用正己烷/異丙醇=90/10封存；而反相色譜柱在使用含酸/堿添加劑的反相流動相后，需用乙腈/水=90/10沖洗色譜柱50 min，然后用乙腈/水=90/10封存；使用含緩沖鹽流動相后，需要用不含緩沖鹽同比例流動相沖洗色譜柱30min，然后用乙腈/水=90/10封存。

此外，由于色譜柱內部保存液具有揮發(fā)性，因此為了減少其揮發(fā)速度，可以添加5%-10%的水，這樣的話可以在一定程度上減少一些有機系的揮發(fā)。如果再增加一個保險，可以在堵緊堵頭后，再用封口膜封起來。

比較臟的樣品分析，比如含蛋白的血液體液樣品、高糖的柿子等水果、以及色素含量高的樣品，嚴重的可以導致色譜柱完全堵死。這時候，可以將色譜柱前段的篩板拆卸，超聲清洗。

液相色譜柱的日常使用，除非樣品處理效果特別好，不然在一般情況下，保護柱對樣品分析效果不影響顯著的情況，色譜柱前段增加保護柱，并根據色譜柱增加保護柱之后柱壓的增幅，定期更換保護柱柱芯。

填裝色譜柱的技術會嚴格的要求，如果沒有專業(yè)的儀器和正確的操作方法是不建議自行裝柱的，要把色譜柱維修好的可能性幾乎為零。

異丙醇是一個非常好的作為中間步驟的溶劑，因為它能與正己烷或二氯甲烷互溶又能與水相溶劑互溶，但是異丙醇粘度非常大，必須確保較低的流速以免使泵壓過高。沖洗色譜柱時，沖洗液由色譜柱出液端直接接入廢液瓶，不能流經檢測池，以避免檢測池被污染。