干貨 | HPLC峰型問(wèn)題之分叉峰原因分析

欄目：行業(yè)資訊發(fā)布時(shí)間：2023-10-07

在HPLC中，色譜峰的頂端出現(xiàn)分叉的峰叫做分叉峰，分叉峰的出現(xiàn)與樣品的進(jìn)樣量和色譜柱等因素有關(guān)。

分叉峰

分叉峰原因及解決方法

溶劑效應(yīng)

原因：大體積進(jìn)樣，導(dǎo)致樣品產(chǎn)生的峰過(guò)早的洗脫出色譜柱，從而導(dǎo)致分叉峰。

解決方法：對(duì)樣品進(jìn)行蒸發(fā)濃縮，從而減少進(jìn)樣體積；或者進(jìn)樣溶劑改為用水稀釋，與流動(dòng)相更為兼容，即使進(jìn)樣體積較大也不會(huì)出現(xiàn)峰變形。較早流出的峰或靠近溶劑前沿的峰更容易出現(xiàn)拖尾。在液相色譜中用溶于流動(dòng)相的小體積進(jìn)樣最為理想。

注意：樣品要現(xiàn)配現(xiàn)用，避免樣品溶解液的有機(jī)相比例、pH值發(fā)生變化而導(dǎo)致的溶劑效應(yīng)

色譜柱篩板堵塞

原因：色譜柱的進(jìn)出口的篩板堵塞，樣品進(jìn)入色譜柱時(shí)會(huì)受阻，液體流動(dòng)受阻形成延遲，使得樣品在相中停留時(shí)間變長(zhǎng)，從而使峰型拖尾。

解決方法：

配置流動(dòng)相時(shí)污染流動(dòng)相使用色譜純?nèi)芤?，現(xiàn)配現(xiàn)用，并通過(guò)4.5um濾膜過(guò)濾后方可使用。

型號(hào)規(guī)格插口不匹配，在扭緊的時(shí)候造成形變而促使管道阻塞。色譜柱有物理?yè)p壞是會(huì)造成峰形拖尾。唯一的解決方法就是更換新柱。

樣品存在雜質(zhì)，導(dǎo)致堵塞在篩板處，過(guò)濾樣品

應(yīng)用較高濃的緩存鹽溶液，在關(guān)機(jī)時(shí)將會(huì)在出入口端結(jié)晶體成塊并導(dǎo)致阻塞。

適當(dāng)降低溫度，讓試劑溶解得慢一些。

如以上方法都不能解決堵塞問(wèn)題，則需考慮換一根新的色譜柱。

保護(hù)柱或色譜柱污染

原因：復(fù)雜的樣品基質(zhì)容易造成保護(hù)柱阻塞或污染，進(jìn)而產(chǎn)生色譜峰分叉的現(xiàn)象。色譜柱在開(kāi)始使用時(shí)沒(méi)問(wèn)題，而使用一段時(shí)間后出現(xiàn)峰分叉的現(xiàn)象，很可能是由于色譜柱阻塞或者被污染引起。

解決方法：取下保護(hù)柱再進(jìn)行分析，如有必要可更換保護(hù)柱。如果色譜柱阻塞，拆下來(lái)清洗，如果問(wèn)題仍然存在，可能是柱子被強(qiáng)保留物質(zhì)污染，建議將更換色譜柱。

色譜柱塌陷

原因：色譜柱通常都有其適用的pH、溫度范圍，若使用不當(dāng)會(huì)造成色譜柱填料塌陷，從而導(dǎo)致色譜峰分叉。

解決方法：由于色譜柱塌陷引起的色譜峰分叉很難修復(fù)，建議更換新的色譜柱。

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